疾病监测

作者：王婉婷,刘文韬,赵瑞,孟凡亮,孙迪,魏销玥,袁雪珍,宫雅楠,范佳铭,龙丽瑾,赵雅坤,陈建伶,张建中,闫笑梅

关键词：天然抗体库, 纳米抗体, 噬菌体展示技术

目的本研究拟构建超大容量天然噬菌体纳米抗体库，用于传染病诊断和治疗用的抗体筛选。方法选取1只健康羊驼的脾脏和100只健康羊驼的外周血，提取总RNA并反转录合成cDNA。 通过两次聚合酶链反应（PCR）扩增羊驼重链抗体可变区片段，将酶切纯化扩增产物与载体pSCD-2连接，电转化大肠埃希菌TG1感受态细胞，构建噬菌体纳米抗体展示文库。 并对抗体库转化阳性插入率、纳米抗体序列以及抗体库污染情况进行检测和分析。结果成功构建累计库容量达1.165×1012的天然纳米抗体细胞库，噬菌体展示库滴度>1013 每毫升菌落形成单位（CFU/mL）。 抗体库转化阳性插入率为98.33%（177/180）。 随机选取125个PCR鉴定阳性克隆测序，纳米抗体序列均为独特序列。纳米抗体的互补决定区3的氨基酸长度为6～26个氨基酸，呈正态分布，氨基酸序列存在较大差异。 细胞抗体库和噬菌体展示抗体库均无烈性噬菌体污染。结论本研究成功构建了超大容量天然纳米抗体库，该抗体库多样性良好，为后续从中筛选出具有应用价值的特异性的纳米抗体奠定了基础。

来源：2025年第4期

《疾病监测》期刊编辑部

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