疾病监测

作者：陈志萍,陈益,吴梦,邓晓雨,高雅晴,葛良鹏,杜华茂

关键词：胆固醇依赖性溶细胞素, 猪链球菌, 肺炎球菌, 双抗体夹心酶联免疫吸附法

目的建立猪链球菌溶血素（SLY）的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，通过对SLY进行定量检测来评价猪链球菌产生SLY的能力与致病力。 方法用4种胆固醇依赖性溶细胞毒素的类毒素免疫BALB/c鼠、新西兰大白兔制备高免血清，以间接ELISA方法检测高免血清与重组猪溶素（rSLY）、重组肺溶血素（rPLY）、重组李斯特菌溶血素O（rLLO）和重组产气荚膜梭菌溶血素O（rPFO）的反应性。 以全人单克隆抗体1-10F（专利号CN 113957057B）为捕获抗体、高免血清为检测抗体，经正交试验优化两类抗体的工作浓度，建立双抗体夹心ELISA方法，并对猪链球菌、肺炎球菌、单增李斯特菌、产气荚膜梭菌、溶血性大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的培养液进行特异性试验。 结果间接ELISA方法显示，兔抗rSLYP353L血清与rPLY有交叉反应，鼠抗rPLY血清与rSLY、rLLO有交叉反应，四联血清与rPLY、rSLY、rLLO有较强反应，rPFO与3种血清的反应性较弱。 经优化，双抗体夹心ELISA方法的捕获抗体包被量为100 ng，检测抗体为鼠抗rPLY血清（1∶1 000），在此条件下，检测25～800 ng/mL的rSLY呈线性关系，R2=0.986；对猪链球菌培养液为强阳性反应，对肺炎球菌培养液为弱阳性反应，其他为阴性反应。结论本研究建立的双抗体夹心ELISA方法能定量检测SLY，将为诊断高致病性猪链球菌感染提供新手段。

来源：2024年第12期

《疾病监测》期刊编辑部

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