疾病监测

作者：范佳铭,龙丽瑾,刘文韬,翟康乐,宫雅楠,胡源,孟凡亮,魏销玥,郭亚慧,赵雅坤,王婉婷,张建中,闫笑梅

关键词：鸡源, 天然抗体库, 单链抗体, 噬菌体展示技术

目的本研究拟构建大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库，用于传染病诊断用抗体筛选。方法选取未经免疫的5周龄白来航鸡包括普通级别和无特定病原体级别、罗曼鸡、洛岛红鸡、洛岛白鸡和贵妃鸡，每个品种各5只，共30只。 从法氏囊中提取总RNA，通过反转录合成cDNA。 利用聚合酶链式反应技术扩增全套编码抗体可变区的基因序列。 通过重叠延伸反应，将重链可变区和轻链可变区基因连接成为单链抗体。 将经过回收并酶切纯化的单链抗体克隆到噬菌体载体上，电转化大肠埃希菌 TG1 感受态细胞。结果成功构建库容量达1010的鸡源天然单链抗体库细胞库，噬菌体展示库滴度达1012 菌落形成单位/mL以上。 随机挑选165个单克隆进行菌落PCR鉴定，转化阳性插入率为96.97%（160/165）；随机选取72株阳性克隆进行测序，抗体互补决定区3碱基序列及长度存在显著差异，表明构建的抗体库多样性良好。结论本研究成功构建了大容量鸡源天然单链抗体库，为后续从中筛选出具有应用价值的特异性单链抗体奠定了基础。

来源：2024年第4期

《疾病监测》期刊编辑部

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