疾病监测

作者：邱海燕,张翠彩

关键词：钩端螺旋体, 基因种, 多位点序列分型, 标准菌株

目的依据《病原微生物菌（毒）种国家标准株评价技术标准》（WS/T 812—2022），建立Leptospira interrogans、L. borgpetersenii、L. alexanderi和L. weilii 4种中国常见致病性基因种钩端螺旋体标准菌株。方法以56601、56604、56615、56655 4株致病性代表菌株为研究对象，利用暗视野显微镜开展形态学观察。 以16S rRNA基因为靶基因进行聚合酶链式反应扩增、测序确定所属基因种。 通过多位点序列分型（MLST）方法，对4株代表株进行分子分型分析，确定每株菌株7个位点等位基因号和序列型别（ST）。 综合暗视野显微镜形态学观察、16S rRNA基因测序和MLST分型结果系统评价4株代表菌株经不同传代次数后的分子遗传学稳定性。 同时通过Illumina NovaSeq测序平台对56604、56615和56655开展全基因组测序分析，了解菌株基因组特征。结果暗视野显微镜下，4株代表菌株均具有典型的钩端螺旋体形态。16S rRNA基因序列分析显示，56601、56604、56615和56655分别隶属于L. interrogans、L. borgpetersenii、L. alexanderi和L. weilii 4种不同致病性基因种。 MLST分型结果显示4株代表株隶属于4种不同ST型。 4株代表株在亲代株及在体外连续传代一定代次后，暗视野显微镜下形态不变，所属基因种和MLST基因型结果一致，证明该4株代表株具有良好的分子遗传学稳定性。 基因组测序分析显示，4株代表株基因组大小为3.93～4.69 Mb之间，G+C含量为36.00%～40.87%。结论初步建立并评价了4种中国常见致病性基因种钩端螺旋体标准菌株，为钩端螺旋体病的疾病控制、临床诊断、教学科研、疫苗研发提供菌株资源。

来源：2023年第12期

《疾病监测》期刊编辑部

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