疾病监测

作者：殷启凯,陈晓菁,付士红,刘文婧,李樊,雷雯雯,何英,许松涛,梁国栋,聂凯,王环宇

关键词：Koutango病毒, TaqMan 反转录聚合酶链式反应, 分子检测

目的建立Koutango病毒（KOUTV）的实时荧光定量TaqMan 反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法。方法从GenBank中下载KOUTV基因序列，进行多序列比对分析，针对NS5基因中的高保守序列片段设计KOUTV的特异引物与探针，用4科9种病毒进行检测方法特异性验证，通过平行重复实验验证检测方法稳定性，利用体外转录的RNA标准品建立了KOUTV 的NS5基因拷贝数的绝对定量分析模型。结果引物与探针工作特异性良好，同一样品重复检测循环阈值（Ct）的变异系数均小于1.5%，定量分析模型灵敏度达到1.0×102拷贝/反应。 通过本研究建立的快速检测方法对新疆采集的112批，6 328只蚊虫进行了测定，结果均为阴性。结论成功建立了KOUTV的高特异性、高敏感性的TaqMan RT-PCR检测方法,可应用于实验室和临床诊断。

来源：2020年第3期

《疾病监测》期刊编辑部

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