疾病监测

作者：田国忠

关键词：巢式聚合酶链式反应, 16S rRNA, 脑脊液, 细菌性病原体

目的探讨巢式聚合酶链式反应（PCR）检测脑脊液标本中病原体的可行性，为疾病的快速临床诊断提供参考。方法源自细菌16S rRNA基因序列设计的巢式PCR技术方法，包括2对引物，2次PCR扩增，第1对引物首次PCR扩增脑脊液标本提取的核酸DNA，第2对引物再次PCR扩增，其DNA模板为第1轮PCR扩增产物。 将第2轮PCR扩增产物进行测序，对序列进行比对分析，从而确定感染的病原体。 使用DNA微量分光光度测定布鲁氏菌纯菌核酸DNA，将DNA进行倍比稀释，用于巢式PCR敏感性测试。结果巢式PCR能够检测的最低限约为1个核酸DNA拷贝数。 应用巢式PCR检测40份临床患者的脑脊液标本，扩增结果表明有37份标本获得约1 460 bp的预期扩增条带（不同细菌扩增片段有差异），测序比对结果显示，检出脑膜炎奈瑟菌7份、产碱假单胞菌1份、草假单胞菌22份、嗜麦芽窄食单胞菌2份、肺炎链球菌1份、未知细菌性病原体4份、未检出3份。结论巢式PCR能够快速检测与鉴定脑脊液标本中的细菌性病原体。

来源：2020年第2期

《疾病监测》期刊编辑部

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