疾病监测

作者：黄英,史芸,叶长芸,徐雪芳

关键词：A/B型肉毒梭菌, 实时荧光定量PCR, 特异性, 灵敏性

目的建立针对A/B型肉毒梭菌毒素基因的实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测方法，构建标准曲线，评价该方法的特异性、敏感性及检测下限，以提高肉毒梭菌检测的快速性、准确性。方法根据肉毒梭菌A/B型毒素基因设计特异性引物及探针，优化反应条件，建立real-time PCR反应体系。 用25种细菌评价该方法的特异性，使用含有A/B型毒素基因特异性序列的重组质粒标准品构建标准曲线，模拟粪便标本，评价建立方法的灵敏度。结果建立的real-time PCR检测方法特异性好，携带A/B型毒素基因的重组质粒均出现相应特异性扩增曲线，对其他25种细菌进行试验扩增时，均未见出现特异性扩增曲线。 根据重组质粒标准品构建的标准曲线可确定其对肉毒梭菌A/B型毒素基因检测灵敏度分别为5.04×102拷贝/μl和6.91×102拷贝/μl。 模拟粪便标本中含有目的基因重组质粒的检测下限为A型1.71×103拷贝/μl，B型2.14×103拷贝/μl。结论本研究设计了适合检测国内肉毒梭菌 A/B 型的引物和探针，建立 real-time PCR 快速检测体系，为我国肉毒梭菌 A/B 型菌株的快速鉴定提供一种新的技术手段。

来源：2019年第9期

《疾病监测》期刊编辑部

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